E Fluoreszenzfilter ass e wesentleche Bestanddeel am Fluoreszenzmikroskop.En typesche System huet dräi Basisfilter: en Excitatiounsfilter, en Emissiounsfilter an en dichroesche Spigel.Si ginn allgemeng an engem Wierfel verpackt, sou datt d'Grupp zesummen an de Mikroskop agebaut gëtt.
Wéi funktionnéiert e Fluoreszenzfilter?
Excitation Filter
Excitatiounsfilter vermëttelen Liicht vun enger spezifescher Wellelängt a blockéieren aner Wellelängten.Si kënne benotzt ginn fir verschidde Faarwen ze produzéieren andeems Dir de Filter ofstëmmt fir nëmmen eng Faarf duerch ze loossen.D'Excitatiounsfilter kommen an zwou Haaptarten - Langpassfilter a Bandpassfilter.Den Exciter ass normalerweis e Bandpassfilter, deen nëmmen d'Wellelängten passéiert, déi vum Fluorophor absorbéiert ginn, sou datt d'Excitatioun vun anere Fluoreszenzquellen miniméiert an d'Excitatiounslicht an der Fluoreszenz Emissiounsband blockéiert.Wéi déi blo Linn an der Figur gewisen, ass BP 460-495, dat heescht datt et nëmmen duerch d'Fluoreszenz vu 460-495nm passéiere kann.
Et gëtt am Beliichtungswee vun engem Fluoreszenzmikroskop plazéiert a filtert all Wellelängte vun der Liichtquell ausser de Fluorophore-Excitatiounsberäich.De Filter Minimum Iwwerdroung diktéiert d'Hellegkeet an d'Brillanz vu Biller.E Minimum vu 40% Iwwerdroung fir all Excitatiounsfilter ass recommandéiert sou datt d'Transmissioun idealerweis > 85% ass.D'Bandbreedung vum Excitatiounsfilter soll ganz am Fluorophore-Excitatiounsberäich sinn, sou datt d'Zentrumwellelängt (CWL) vum Filter sou no wéi méiglech un der Spëtzecitatiounswellelängt vum Fluorophor ass.D'Excitatiounsfilter optesch Dicht (OD) diktéiert d'Däischtert vum Hannergrond vum Bild;OD ass eng Moossnam fir wéi gutt e Filter d'Wellelängten ausserhalb vum Iwwerdroungsberäich oder Bandbreed blockéiert.E Minimum OD vun 3.0 ass recommandéiert awer en OD vu 6.0 oder méi ass ideal.
Emissioun Filter
Emissiounsfilter déngen den Zweck fir déi wënschenswäert Fluoreszenz aus der Probe fir den Detektor z'erreechen.Si blockéieren méi kuerz Wellelängten an hunn eng héich Iwwerdroung fir méi laang Wellelängten.De Filtertyp ass och mat enger Zuel verbonnen, zB BA510IF an der Figur (Interferenzbarriärfilter), déi Bezeechnung bezitt sech op d'Wellelängt bei 50% vu senger maximaler Iwwerdroung.
Déiselwecht Empfehlungen fir Excitatiounsfilter gëllen fir Emissiounsfilter: Minimum Iwwerdroung, Bandbreedung, OD an CWL.En Emissiounsfilter mat der idealer CWL, minimaler Iwwerdroung an OD Kombinatioun bitt déi hellst méiglech Biller, mat der déifst méiglecher Blockéierung, a garantéiert d'Detektioun vun de schwaachsten Emissiounssignaler.
Dichroic Spigel
Den dichroesche Spigel gëtt tëscht dem Excitatiounsfilter an dem Emissiounsfilter an engem 45 ° Wénkel plazéiert a reflektéiert d'Excitatiounssignal Richtung Fluorophor wärend d'Emissiounssignal an den Detektor iwwerdroen.Ideal dichroesch Filteren a Strahlsplitter hunn scharf Iwwergäng tëscht maximaler Reflexioun a maximaler Iwwerdroung, mat enger >95% Reflexioun fir d'Bandbreedung vum Excitatiounsfilter an enger Iwwerdroung vun >90% fir d'Bandbreedung vum Emissiounsfilter.Wielt de Filter mat der Kräizungswellelängt (λ) vun der Fluorophore am Kapp, fir Sträif-Liicht ze minimiséieren an de fluoreszent Bild Signal-zu-Geräisch Verhältnis ze maximéieren.
Den dichroesche Spigel an dëser Figur ass den DM505, sou genannt well 505 Nanometer d'Wellelängt bei 50% vun der maximaler Iwwerdroung fir dëse Spigel ass.D'Transmissiounskurve fir dëse Spigel weist héich Iwwerdroung iwwer 505 nm, e steile Réckgang an der Iwwerdroung lénks vu 505 Nanometer, a maximal Reflexivitéit lénks vu 505 Nanometer, awer nach ëmmer eng Iwwerdroung ënner 505 nm.
Wat ass den Ënnerscheed tëscht laange Pass a Bandpassfilter?
Fluoreszenz Filtere kënnen an zwou Zorte ënnerdeelt ginn: laang Pass (LP) a Band Pass (BP).
Laangpassfilter vermëttelen laang Wellelängten a blockéieren déi méi kuerz.D'Schnëttwellelängt ass de Wäert bei 50% vun der Peak-Transmissioun, an all Wellelängten iwwer dem Schnëtt gi vun de laange Passfilter iwwerdroen.Si ginn dacks an dichroesche Spigelen an Emissiounsfilter benotzt.Longpass Filtere solle benotzt ginn wann d'Applikatioun maximal Emissioun Sammlung erfuerdert a wann Spektraldiskriminéierung net wënschenswäert oder néideg ass, wat allgemeng de Fall ass fir Sonden déi eng eenzeg emittéierend Spezies an Exemplare mat relativ nidderegen Niveauen vun Autofluoreszenz am Hannergrond generéieren.
Bandpassfilter vermëttelen nëmmen eng bestëmmte Wellelängtband, a blockéieren anerer.Si reduzéieren Crosstalk andeems se nëmmen de stäerkste Deel vum Fluorophoremissiounsspektrum iwwerdroe loossen, Autofluoreszenzrauschen reduzéieren an domat d'Signal-ze-Geräischer Verhältnis an héijen Hannergrond Autofluoreszenz Echantillon verbesseren, déi laang Passfilter net ubidden.
Wéi vill Zorte vu Fluoreszenzfiltersets kënne BestScope liwweren?
E puer allgemeng Zorte vu Filtere enthalen blo, gréng an ultraviolet Filter.Wéi an der Tabell gewisen.
| Filter Set | Excitation Filter | Dichroic Spigel | Barrière Filter | LED Lampe Wellelängt | Applikatioun |
| B | BP460-495 | DM505 | BA 510 | 4 85nm | · FITC: Fluoreszent Antikörper Method ·Acidin orange: DNA, RNA · Auramine: Tuberkulos Bacillus ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA 575 | 535 nm | · Rhodamine, TRITC: Fluoreszent Antikörpermethod · Propidiumjodid: DNA · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365 nm | ·Auto-fluorescence Observatioun · DAPI: DNA staining · Hoechest 332528, 33342: benotzt fir Chromosomen-Faarwen |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 4 05nm | · Katecholaminen · 5-Hydroxy Tryptamin ·Tetracyclin: Skelett, Zänn |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640 nm | ·Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Filtersets, déi a Fluoreszenz Acquisitioune benotzt ginn, sinn ronderëm déi grouss Wellelängten entworf, déi a Fluoreszenzapplikatiounen benotzt ginn, déi ronderëm déi meescht benotzte Fluorophoren baséiert.Aus dësem Grond gi se och nom Fluorophore benannt, deen se fir d'Bildgebung geduecht sinn, wéi DAPI (blo), FITC (gréng) oder TRITC (rout) Filterwierfelen.
| Filter Set | Excitation Filter | Dichroic Spigel | Barrière Filter | LED Lampe Wellelängt |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 4 85nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365 nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535 nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450 nm |
| Texas Rot | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 5 60nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 5 60nm |
Wéi wielt Dir e Fluoreszenzfilter?
1. De Prinzip fir de Fluoreszenzfilter auswielen ass d'Fluoreszenz / Emissiounslicht esou wäit wéi méiglech duerch d'Bildendung ze loossen, a gläichzäiteg d'Excitatiounsliicht komplett ze blockéieren, fir deen héchste Signal-to-Geräisch Verhältnis ze kréien.Besonnesch fir d'Applikatioun vu Multiphoton Excitatioun a total internen Reflexiounsmikroskop wäert de schwaache Kaméidi och grouss Stéierunge fir den Imaging Effekt verursaachen, sou datt d'Ufuerderung fir Signal a Geräischer Verhältnis méi héich ass.
2. Wësst d'Excitatioun an d'Emissiounsspektrum vum Fluorophore.Fir e Fluoreszenzfilterset ze konstruéieren, deen e qualitativ héichwäertegt, héichkontrastbild mat engem schwaarzen Hannergrond generéiert, sollten d'Excitatiouns- an d'Emissiounsfilter eng héich Iwwerdroung mat minimale Passband-Ripple iwwer d'Regiounen erreechen, déi mat de Fluorophore-Excitatiounspeaks oder Emissiounen entspriechen.
3. Bedenkt d'Haltbarkeet vu Fluoreszenzfilter.Dës Filtere musse impervious sinn fir intensiv Liichtquellen, déi ultraviolet (UV) Liicht generéieren, dat zu "Burnout" kéint féieren, besonnesch vum Exciterfilter, well et der voller Intensitéit vun der Beliichtungsquell ënnerworf ass.
Déi verschidde Fluorescent Sample Biller
D'Ressourcen ginn um Internet gesammelt an organiséiert, a ginn nëmme fir Léieren a Kommunikatioun benotzt.Wann et eng Verletzung ass, kontaktéiert eis w.e.g. fir ze läschen.
Post Zäit: Dez-09-2022